與醫(yī)學(xué)相關(guān)的論文的范文錦集
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談百合固金湯、四逆湯含藥血清對TLR2和TLR4比值的影響
本項研究所用四逆湯為《傷寒論》之經(jīng)方，百合固金湯典出明代《慎齋遺書》。此兩方之立方均據(jù)張仲景之六經(jīng)辯證。且推其早年之回陽救逆和滋陰養(yǎng)肺功效均與感染性疾病有不解之緣。此兩方之藥理又恰為中醫(yī)養(yǎng)陰回陽治則之代表。故選此兩方為對照，觀察機體感染發(fā)生過程中，兩者對固有免疫調(diào)節(jié)之異同，極有可能揭示養(yǎng)陰回陽兩種治則對免疫細(xì)胞之實際作用。在基于經(jīng)驗的中醫(yī)臨床治則和基于實證的現(xiàn)代免疫藥理之間牽起一線姻緣。
Toll樣受體(Toll-like receptor，TLR)是表達(dá)于巨噬細(xì)胞表面的一類模式識別受體(pattern recognition receptor， PRR)，在固有免疫應(yīng)答中發(fā)揮了重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)TLR2與TLR4在炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中并非起協(xié)同作用，研究發(fā)現(xiàn)TLR2的表達(dá)能抑制TLR4信號的過度激活。故推測TLR2和TLR4可能是養(yǎng)陰回陽兩種治則對免疫細(xì)胞，尤其對固有免疫細(xì)胞的功能產(chǎn)生調(diào)節(jié)的重要物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理作用靶標(biāo)。TLR2和TLR4是識別結(jié)核分枝桿菌的主要模式識別受體，此文選取臨床治療結(jié)核感染的百合固金湯和對感染性休克起治療作用的四逆湯為例，觀察兩方對RAW264.7細(xì)胞表面TLR2和TLR4比值是否存在影響，作為深入探討?zhàn)B陰回陽治則在抗感染作用研究中的引玉之磚。
1 材料與方法
1.1 動物、細(xì)胞及細(xì)菌
體重(2.00.2)kg，健康雄性新西蘭大白兔10只，由上海中醫(yī)藥大學(xué)動物實驗中心提供。小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7，購自中國科學(xué)院上海細(xì)胞生物學(xué)研究所。結(jié)核分枝桿菌株H37Ra，引自上海復(fù)旦大學(xué)遺傳學(xué)研究所。
1.2 主要試劑
百合固金湯和四逆湯個飲片，均購自上海養(yǎng)和堂中藥飲片有限公司;慶大霉素注射液，購自上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院;DMEM高糖培養(yǎng)液、胎牛血清、胰酶，均購自Gibco公司;7H9、7H10培養(yǎng)基，均購自BD Difco公司;TRIzol試劑， 購自Invitrogen公司;逆轉(zhuǎn)錄試劑盒及2PCR Mixture， 購自TAKARA 公司;PCR 引物，由上海生工生物工程有限公司合成;FITC標(biāo)記anti-mouse CD282(TLR2)熒光抗體與PE標(biāo)記anti-mouse CD284(TLR4)熒光抗體及其同型對照，均購自于Biolegend公司;PCR-Fluorescent Probing試劑盒，購自凱杰生物工程(深圳)有限公司。
1.3 細(xì)菌培養(yǎng)
用含10%ADC的7H9培養(yǎng)液，在37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每周觀察1次，一般培養(yǎng)1～2周可見瓶底有細(xì)菌顆粒生長，(10～15)d達(dá)對數(shù)生長期。取對數(shù)生長期細(xì)菌用不含血清的DMEM 培養(yǎng)液重懸，調(diào)整細(xì)胞密度為1107 個/ml。
1.4 細(xì)胞培養(yǎng)
小鼠巨噬細(xì)胞RAW264.7按常規(guī)方法用含有10%胎牛血清的DMEM 高糖培養(yǎng)液，在37℃，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞密度為1106 個/ml，以每孔2ml鋪于6孔板中，24h后用于后續(xù)實驗。
1.5 含藥血清的制備及細(xì)胞干預(yù)
各方按臨床用藥量乘以動物的體表面積系數(shù)求得相應(yīng)給藥量，經(jīng)常規(guī)方法煎煮，濃縮至10倍劑量置4℃冰箱備用。10只新西蘭大白兔隨機分為空白對照組(control，4只)、百合固金湯組(BGD，3只)和四逆湯組(SND，3只)。各用藥組按10ml/kg灌服相應(yīng)藥液，對照組灌服等量生理鹽水。每日1次，連續(xù)4d。于最后一次灌胃1h后心臟采血(最后一次給藥前禁食不禁水12h)分離血清，同組動物血清混勻，56℃滅活30min后，經(jīng)0.22m 微孔濾膜過濾除菌，分裝置-80℃冰箱備用。將RAW264.7細(xì)胞密度調(diào)整為1106 個/ml，每組設(shè)3復(fù)孔，2ml/孔鋪于6孔板常規(guī)培養(yǎng)24h后，各用藥組加入含10%相應(yīng)含藥血清的DMEM 培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，對照組加入含10%空白兔血清培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，24h后檢測各組TLR2、TLR4的mRNA 及蛋白表達(dá)量。
1.6 感染模型建立及藥物干預(yù)
模型組用含10%空白兔血清的培養(yǎng)液重懸沉淀細(xì)胞，分別作用24h和48h后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)的檢測。各含藥血清組及對照組按照細(xì)胞∶細(xì)菌為1∶10的比例加入用10%相應(yīng)含藥血清培養(yǎng)液重懸的細(xì)菌，密度為1107 個/ml的Mtb H37Ra，2ml/孔。
1.7 指標(biāo)測定
TLR2與TLR4的mRNA表達(dá)以RT-QPCR 的方法檢測， 以GAPDH 作為內(nèi)參，結(jié)果用2-△△Ct表示。TLR2與TLR4蛋白表達(dá)水平的檢測，以FACS檢測細(xì)胞表面TLR2與TLR4的表達(dá)百分比。細(xì)胞吞噬、殺菌能力測定，以QPCR檢測巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核分枝桿菌DNA含量： 按照凱杰生物工程(深圳)有限公司的PCRFluorescent Probing試劑盒說明做標(biāo)準(zhǔn)曲線后計算各樣本中的結(jié)核分枝桿菌拷貝數(shù)。
1.8 統(tǒng)計學(xué)分析
所有數(shù)據(jù)以xs表示，應(yīng)用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，多組間比較采用單因素方差分析，二組間比較采用t檢驗，P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 百合固金湯和四逆湯
含藥血清對TLR2與TLR4 mRNA表達(dá)的影響及其比值的改變 表1結(jié)果顯示，與對照組相比，百合組RAW264.7細(xì)胞TLR2mRNA的表達(dá)沒有明顯差異(P0.05)，但TLR4mRNA 水平較之上升明顯(P 0.05)，TLR2/TLR4 下調(diào)明顯(P 四逆組RAW264.7細(xì)胞TLR2及TLR4mRNA的表達(dá)都明顯上升(P0.05)，但TLR2/TLR4較之無明顯差異。兩用藥組之間比較TLR2、TLR4及TLR2/TLR4的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。
2.2 百合固金湯和四逆湯
含藥血清對TLR2與TLR4蛋白表達(dá)的影響及其比值的改變 圖1、表2結(jié)果表明，與對照組相比，兩用藥組RAW264.7細(xì)胞表面TLR2和TLR4表達(dá)百分率均有上升，TLR2增加尤為明顯(P0.05)，兩用藥組之間相比可見百合組TLR2 百分?jǐn)?shù)較四逆組低(P 0.05)，但TLR4百分?jǐn)?shù)較四逆組高(P0.05)。表中結(jié)果顯示，與對照組相比，百合組TLR2/TLR4比值比空白組略低，但不明顯(P0.05)，而四逆組TLR2/TLR4比值明顯高于空白組(P0.05)，兩用藥組相比，四逆組TLR2/TLR4比值較百合組增長更明顯(P0.05)。
2.3 百合固金湯和四逆湯含
藥血清對巨噬細(xì)胞吞噬殺菌能力的影響 QPCR法檢測巨噬細(xì)胞內(nèi)結(jié)核桿菌DNA的表達(dá)水平，以細(xì)菌數(shù)量取lg10作統(tǒng)計處理，圖2顯示Mtb H37Ra與RAW264.7細(xì)胞作用24h和48hQPCR法檢測到的細(xì)菌含量差異，24h結(jié)果顯示三組之間無明顯差異，而48h的結(jié)果顯示百合組的細(xì)菌含量較其他兩組明顯減少(P0.05)。各用藥組24h和48h的前后比較發(fā)現(xiàn)百合組較之對照組和四逆組其殺菌能力明顯提高(P0.05)，提示百合固金湯抗癆作用可能與調(diào)節(jié)TLR2/TLR4比值相關(guān)。
3 討論
TLR是一種重要的PRR，能夠識別多種病原相關(guān)分子模式(PAMP)，TLR的研究已涉及到腫瘤，自身免疫性疾病，自身代謝性疾病及各種感染性疾病等多個領(lǐng)域。在目前發(fā)現(xiàn)的10種人類TLR中，TLR2與TLR4是其中研究得較為清楚的兩種。TLR2可廣泛識別多種病原相關(guān)分子模式，包括革蘭陽性菌的磷壁酸和肽聚糖、分枝桿菌胞壁組分、細(xì)菌脂蛋白、鉤端螺旋體的LPS、酵母菌細(xì)胞壁等等，TLR4是第一個在哺乳動物發(fā)現(xiàn)的TLR，可以識別LPS、磷壁酸、熱休克蛋白、呼吸道合胞病毒F蛋白等配體。以往許多研究顯示TLR2、TLR4能夠啟動機體的固有免疫應(yīng)答，對病原體發(fā)揮殺滅清除作用。通常認(rèn)為TLR2、TLR4都可經(jīng)MyD88(myeloid differentiation factor 88)途徑調(diào)控炎癥基因的轉(zhuǎn)錄。但也不排除兩者都存在有非MyD88依賴的轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。盡管多數(shù)文獻(xiàn)認(rèn)為TLR2與TLR4在炎癥信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中起協(xié)同作用，但Finamore等對乳酸桿菌的研究時發(fā)現(xiàn)，TLR2在抑制TLR4信號過度激活的過程中有重要作用，可能成為抗炎治療的新的靶點。而早在2012年，國內(nèi)就有過類似的報道，北京解放軍第306醫(yī)院消化內(nèi)科曹艷菊用雙歧三聯(lián)活菌治療急性結(jié)腸炎模型大鼠，隨后檢測TLR2、TLR4及NF-B的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)益生菌組TLR2表達(dá)較模型組明顯增加，而TLR4表達(dá)明顯下降，NF-B活性較模型組也明顯降低，提示益生菌可能通過進(jìn)一步增加TLR2 的表達(dá)，并抑制TLR4的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控NF-B的活性，以緩解腸道炎癥。這些發(fā)現(xiàn)與本實驗所提供的研究結(jié)果似有類似之處，提示某些藥物或微生物確實可以誘導(dǎo)形成TLR2、TLR4表達(dá)的拮抗局面，并由此而影響感染與炎癥的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。
在本項研究的結(jié)果中，似乎可提示以四逆湯(附子、干姜、甘草)為代表的回陽救逆治則與以百合固金湯(百合、玄參、白芍、生地、熟地等)為代表的養(yǎng)陰治則在對感染過程中識別病原體的PRR表達(dá)類型可產(chǎn)生不同的調(diào)節(jié)格局，如本項研究所顯示?；蛟S百合固金湯對TLR4表達(dá)增高的調(diào)節(jié)作用與其治療結(jié)核病的臨床功效有著內(nèi)在聯(lián)系(啟動炎癥通路，清除細(xì)胞內(nèi)的結(jié)核分枝桿菌);而四逆湯之增高TLR2表達(dá)的作用也是和其治療感染性休克的臨床作用不可分離(有可能通過TLR2/TLR4的拮抗作用，降低了TLR4對LPS的反應(yīng)敏感性)。盡管這樣的推論與猜測還需要更多深入的研究去加以驗證，但目前的發(fā)現(xiàn)無疑是一個新的開端。這為中醫(yī)陰陽理論在感染性疾病的實踐應(yīng)用中所取得的卓越療效提供了可能的科學(xué)解釋。
β―七葉皂苷鈉的藥理毒理作用新研究及不良反應(yīng)對比分析
摘 要：由于療效確切，臨床上廣泛用于腦出血或腦梗死引起的腦水腫、血栓性靜脈炎、靜脈回流障礙性疾病、創(chuàng)傷和手術(shù)后引起的腫脹等疾病。
關(guān)鍵詞：七葉皂苷鈉;藥理作用;不良反應(yīng);對比分析
β-七葉皂苷鈉是臨床上較常見的一種藥物，遮光、密封保存，屬注射劑，為非醫(yī)保類處方藥。主要成分為中藥七葉樹科植物天師栗(Aesculus Wilsonii Rehd.)成熟果實中提取的三萜皂苷的鈉鹽，白色粉末或結(jié)晶性粉末，味苦澀而辣，具引濕性，
注射劑為本品為白色凍干疏松塊狀物，其主要作用機制是抗炎、抗?jié)B出、抗氧自由基、抗水腫、增加靜脈張力，改善血液循環(huán)以及神經(jīng)保護等作用，因該藥口服在胃腸道不吸收，肌肉注射易引起組織壞死，故僅供靜脈注射使用。β-七葉皂苷鈉因具有明顯抗?jié)B出，由于療效確切，臨床上廣泛用于腦出血或腦梗死引起的腦水腫、血栓性靜脈炎、靜脈回流障礙性疾病、創(chuàng)傷和手術(shù)后引起的腫脹等疾病。
一、藥理
本品能促使機體提高ACTH和可的松血漿濃度，能促進(jìn)血管壁增加PGF2α的分泌，能清除機體內(nèi)自由基，從而起到抗炎、抗?jié)B出，提高靜脈張力，加快靜脈血流，促進(jìn)淋巴回流，改善血液循環(huán)和微循環(huán)，并有保護血管壁的作用。
二、毒理
在日劑量每公斤體重0.5mg以下未發(fā)現(xiàn)溶血現(xiàn)象。急性毒性研究：靜脈注射LD50劑量，動物發(fā)生急性中毒，主要表現(xiàn)為實質(zhì)性器官(心、肝、腎)的溶血性缺氧壞死;對黏膜和肌肉組織有較強的刺激作用。慢性毒性研究：每天靜脈給予家兔相當(dāng)于LD50的1/5劑量，連續(xù)30天，未發(fā)生動物死亡，其實質(zhì)器官也未發(fā)生任何病理性變化。致畸試驗：無致畸作用，觀測到孕婦頭3個月羊水中藥物含量較高，故建議孕婦禁用。
七葉皂苷鈉的半衰期僅為1.5小時，但因能促進(jìn)機體增加ACTH、前列腺素F2α的分泌，使生物效應(yīng)維持時間較長，靜脈注射16小時后，仍有抗?jié)B出、消腫作用。靜脈給藥，幾乎沒有生物轉(zhuǎn)化，注射1小時后，有1/3劑量排泄，其中2/3通過膽汁排入腸道，1/3進(jìn)入尿中。七葉皂苷與血漿蛋白結(jié)合率在90%以上。
1.可見注射部位局部疼痛、腫脹，經(jīng)熱敷可使癥狀消失。
2.偶有過敏反應(yīng)，可按藥物過敏處理原則治療。
但對近幾年來應(yīng)用七葉皂苷鈉的治療作用及不良反應(yīng)進(jìn)行整理歸納和分析， 將七葉皂苷鈉15毫克與地塞米松20毫克靜滴的作用對比，提出如下建議，為臨床合理用藥提供參考。
一、地塞米松禁忌
為對本品及腎上腺皮質(zhì)激素類藥物有過敏史患者禁用，特殊情況下權(quán)衡利弊使用，注意病情惡化的可能：高血壓、血栓癥、胃與十二指腸潰瘍、精神病、電解質(zhì)代謝異常、心肌梗塞、內(nèi)臟手術(shù)、青光眼等患者一般不宜使用。
二、注意事項
1.結(jié)核病、急性細(xì)菌性或病毒性感染患者應(yīng)用時，必須給予適當(dāng)?shù)目垢腥局委煛?.長期服藥后，停藥前應(yīng)逐漸減量。3.糖尿病、骨質(zhì)疏松癥、肝硬化、腎功能不良、甲狀腺功能低下患者慎用。
2.孕婦及哺乳期婦女用藥，妊娠期婦女使用可增加胎盤功能不全、新生兒體重減少或死胎的發(fā)生率，動物試驗有致畸作用，應(yīng)權(quán)衡利弊使用。乳母接受大劑量給藥，則不應(yīng)哺乳，防止藥物經(jīng)乳汁排泄，造成嬰兒生長抑制、腎上腺功能抑制等不良反應(yīng)。
3.兒童用藥小兒如使用腎上腺皮質(zhì)激素，須十分慎重，用激素可抑制患兒的生長和發(fā)育，如確有必要長期使用時，應(yīng)使用短效或中效制劑，避免使用長效地塞米松制劑。并觀察顱內(nèi)壓的變化。
4.老年患者用藥易產(chǎn)生高血壓及糖尿病，老年患者尤其是更年期后的女性使用易加重骨質(zhì)疏松。
三、藥理毒理
腎上腺皮質(zhì)激素類藥。具有抗炎、抗過敏、抗風(fēng)濕、免疫抑制作用，其作用機理為：1.抗炎作用：本品減輕和防止組織對炎癥的反應(yīng)，從而減輕炎癥的表現(xiàn)。能夠抑制炎癥細(xì)胞，包括巨噬細(xì)胞和白細(xì)胞在炎癥部位的集聚，并抑制吞噬作用、溶酶體酶的釋放以及炎癥化學(xué)中介物的合成和釋放。2.免疫抑制作用：包括防止或抑制細(xì)胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，延遲性的過敏反應(yīng)，減少T淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、噬酸性細(xì)胞的數(shù)目，降低免疫球蛋白與細(xì)胞表面受體的結(jié)合能力，并抑制白介素的合成與釋放，從而降低T淋巴細(xì)胞向淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化，并減輕情原發(fā)免疫反應(yīng)的擴展。本品還降低免疫復(fù)核物通過基底膜，并能減少補體成分及免疫球蛋白的濃度。
七葉皂苷鈉與地塞米松療效對比分析
1、β-七葉皂苷鈉與地塞米松治療糖尿病、結(jié)核病的臨床療效對比。經(jīng)研究，20mg地塞米松對于健康人來說，沒有什么大問題。但是，對于糖尿病病人來說可能誘發(fā)酮癥酸中毒導(dǎo)致死亡;對于結(jié)核病人來說可以加速結(jié)核菌的擴散;對于，骨質(zhì)疏松癥的病人來說會加重病情等等，皂苷鈉則安全有效，具有滿意的臨床效果。
2.β-七葉皂苷鈉與地塞米松治療面神經(jīng)炎的臨床療效對比。對比研究地塞米松與β-七皂苷鈉治療面神經(jīng)炎的臨床療效。方法回顧性總結(jié)我院收治的面神經(jīng)炎患者62例治療資料。結(jié)果治療開始后2w時，觀察組31例患者顯效19例，有效11例，總有效率96.8%，明顯高于對照組療效結(jié)果(總有效率為83.9%)(< 0.05)，而兩組患者在治療開始后4w時的總有效率統(tǒng)計結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義(100%VS96.8%)(< 0.05)。結(jié)論β-七《皂苷鈉治療面神經(jīng)炎安全有效，具有滿意的臨床效果。
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