病理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)論文

病理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)論文

　　病理學(xué)是以形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ)的橋梁學(xué)科,需要掌握的知識很多,這是學(xué)習(xí)啦小編為大家整理的病理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)論文，僅供參考!

　　病理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)論文篇一

　　皮膚組織病理學(xué)檢查

　　【關(guān)鍵詞】皮膚;病理學(xué);標(biāo)本制備

　　皮膚是人體的一個重要器官，由趙辨教授主編的新版《中國臨床皮膚病學(xué)》收集了1700多種皮膚病。皮疹是皮膚病的主要表現(xiàn)，臨床變化多種多樣，有的缺乏特異性，有些不同的皮膚病臨床皮疹類似，需要借助皮膚組織病理學(xué)檢查等技術(shù)才能做出診斷。由于皮膚組織位于人體表面，取材較容易，可對處于不同階段的皮疹進(jìn)行病理檢查，是皮膚科高年資臨床醫(yī)生必需掌握的臨床輔助診斷方法。

　　皮膚病理檢查(簡稱活檢)是通過環(huán)鉆或小手術(shù)取下一小部分病灶皮膚，經(jīng)過固定、染色等技術(shù)在顯微鏡下或電腦上觀察其變化的診斷技術(shù)。

　　適應(yīng)證

　　活檢的目的在于確定診斷和了解病情，因此，對任何臨床上診斷不明的皮膚病都可以進(jìn)行皮膚活檢，根據(jù)其診斷價值的不同可分為以下幾類。1 有高度診斷價值者，如基底細(xì)胞癌、鱗狀細(xì)胞癌、痣等良惡性腫瘤、病毒性皮膚病如傳染性軟疣、角化性皮膚病如毛囊角化病、汗管角化病等。

　　2 有診斷價值者，如皰疹類皮膚病(天皰瘡、家族性慢性良性天皰瘡等)、代謝性皮膚病(原發(fā)性皮膚淀粉樣變性、腔前黏液性水腫等)、某些肉芽腫性皮膚病(環(huán)狀肉芽腫、結(jié)節(jié)病等)、有一定特征的炎性疾病如扁平苔蘚、結(jié)核、麻風(fēng)、深部真菌等。

　　3 早期發(fā)現(xiàn)病損的不良轉(zhuǎn)化或癌前病變。

　　4 提示做進(jìn)一步的其他檢查或與全身其他疾病的關(guān)系。

　　5 疑難少見病例，通過皮膚病理及其他檢查尋找診斷線索。

　　6 對有些不具特征性組織像的皮膚病雖然不能直接診斷，但仍具有參考或除外其他疾病的價值。

　　綜上所述，皮膚活檢的適應(yīng)證較廣，不過應(yīng)盡量做到有的放矢，而切忌任意采取標(biāo)本，造成患者不必要的痛苦。

　　皮疹活檢標(biāo)本的選擇

　　在選擇皮膚活檢標(biāo)本時應(yīng)注意以下原則。

　　1 選擇發(fā)育成熟的損害，因?yàn)樵缙谄ふ畛榉翘禺愋裕砥谄ふ畲蠖嗵幱诨謴?fù)或變性、壞死階段。

　　2 選擇早期皮疹，適用于皰疹性皮膚病以及含有病原微生物的皮疹，最好在損害出現(xiàn)24～48小時以內(nèi)取材。

　　3 對于環(huán)狀皮疹應(yīng)選擇活動邊緣部分，如切取中央不活動的部分，病變可能已趨向于消退而找不到典型病變。

　　4 切取標(biāo)本時應(yīng)常規(guī)包括皮下組織，因不少皮膚病的典型病變在皮下組織。有些特殊疾病如皮肌炎等還要切到肌肉。

　　5 取材時應(yīng)包括一小部分正常組織，以便與病變組織對照。

　　6 應(yīng)盡量避免在腋窩、腹股溝、面部顯眼處或關(guān)節(jié)活動部位等處取材。

　　獲取皮膚標(biāo)本的方法

　　1 手術(shù)切除 最常用，可根據(jù)需要切取大小不同的皮膚標(biāo)本，深及皮下組織，對皰疹特別是皮下結(jié)節(jié)、囊腫和腫瘤尤為適合。注意事項(xiàng)：(1)切刀須銳利，切除的組織上下等大;(2)切口方向與皮紋一致，兩端對齊;(3)避免夾壓組織，盡量夾持切下組織的兩端，切忌夾持中央部分。

　　2 環(huán)鉆 簡便易行，適用于小損害，或病變只限于表皮和真皮，或手術(shù)切除有困難的病例。

　　3 削切 只能切取表皮淺層，一般很少采用。

　　活檢標(biāo)本的切片制作

　　皮膚切片的制作過程同其他病理組織，操作步驟如下：標(biāo)本-固定-脫鈣-水洗-硬化-脫水-透明-包埋-切片。皮膚組織結(jié)構(gòu)不同于其他器官，分層明顯，因而欲制成高質(zhì)量的皮膚切片，應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：(1)脫水最好保持在一定溫度(52～54℃)下進(jìn)行，脫水應(yīng)完全，依次在70%、80%、95%酒精中各脫水2小時，最后在無水酒精中(Ⅰ和Ⅱ)各脫水1.5小時;(2)透明時間視皮膚組織塊的大小和厚薄而定，一般經(jīng)二甲苯Ⅰ和Ⅱ各2～3分鐘;(3)石蠟包埋浸蠟時，保溫箱內(nèi)溫度一般調(diào)節(jié)在52～56℃溶蠟，溫度過高可使組織發(fā)生變質(zhì)。

　　切片染色

　　1 蘇木素-伊紅染色法(簡稱HE) 常規(guī)病理染色方法，染色過程中應(yīng)注意：(1)皮膚石蠟包埋切片的脫蠟應(yīng)完全，冬季可預(yù)先放在56℃溫箱內(nèi)2小時，使切片上剩余的石蠟溶解;(2)切片于二甲苯Ⅰ和Ⅱ內(nèi)浸泡應(yīng)各達(dá)15～20分鐘;(3)切片經(jīng)蘇木素染色后，在染伊紅前，經(jīng)1%酸性酒精處理2～3秒，流水沖洗至少20～30分鐘。

　　2 特殊染色法 對某些皮膚病的診斷和鑒別診斷有一定幫助。常用的一些特殊染色方法、目的和結(jié)果見表1。

　　3 免疫組織化學(xué)染色 HE染色切片，有時很難區(qū)分其組織來源，而確定組織來源對診斷具有重要價值，這時需免疫組織化學(xué)染色來幫助診斷。常用免疫組織化學(xué)染色見表2。

　　切片觀察

　　傳統(tǒng)的切片觀察是通過顯微鏡下進(jìn)行，根據(jù)需要有普通光學(xué)、偏振光、熒光顯微鏡等，隨著科學(xué)的發(fā)展，通過切片掃描技術(shù)，可直接在電腦上進(jìn)行讀片診斷。

　　診斷思維

　　1 整體觀，不能只從局部或片段來看問題，先低倍掃視分析病變的結(jié)構(gòu)模式，對每一個活檢病例應(yīng)了解其全貌，如有必要還應(yīng)該對各個階段的皮疹作相應(yīng)的病理檢查。

　　2 同一疾病的不同階段其病理改變亦不盡相同，對每一個疾病來說，都有一個過程，大致可分為早期、充分發(fā)育期和晚期，我們均應(yīng)熟悉疾病各階段組織學(xué)改變的特點(diǎn)，以達(dá)到正確診斷。

　　3 密切結(jié)合臨床，對每一個活檢的病例，應(yīng)仔細(xì)觀察并作出詳細(xì)記錄，以便于在作病理診斷時，能與臨床情況結(jié)合起來考慮避免犯錯誤。

　　4 捕捉診斷線索，排除假象，通過鑒別診斷達(dá)到正確、特異的診斷。

　　5 正確使用臨床皮膚病學(xué)及組織病理學(xué)的術(shù)語。

　　6 掌握皮膚基本病理變化及各種皮膚病的病理特點(diǎn)，反復(fù)實(shí)踐，逐步掌握皮膚病理診斷技術(shù)。

　　7 臨床是基礎(chǔ)，HE切片對診斷很重要、免疫組化染色和分子病理是其必要補(bǔ)充。

　　病理學(xué)試驗(yàn)技術(shù)論文篇二

　　乙草胺致癌病理學(xué)試驗(yàn)的評價

　　關(guān)鍵詞： 乙草胺 毒理

　　乙草胺(Acetochlor)是選擇性旱田芽前除草劑，主要用于玉米、大豆、棉花、甘蔗及多種菜田，每畝一次施藥50～80 g可控制整個生長期無雜草危害，是有推廣價值的新型除草劑。急性毒性經(jīng)口、經(jīng)皮LD50分別為2 148 mg/kg、4 166 mg/kg，SD大鼠亞慢性90 d喂喟試驗(yàn)的最大無作用劑量為12 mg·kg-1..d-1,Ames、微核及睪丸染色體試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。我們又進(jìn)一步作了兩年致癌試驗(yàn)，現(xiàn) 報告如下。

　　1　材料與 方法

　　1.1　供試樣品　95%乙草胺由江蘇省昆山化工廠、南通化工廠、遼寧省大連農(nóng)藥廠、河北省宣化農(nóng)藥廠分批提供。

　　1.2　實(shí)驗(yàn)動物　清潔級5周齡SD健康大鼠，由上海BK公司提供，動物檢疫馴化1周開始給藥。設(shè)1個對照組，200、700、2 000 mg/kg·飼料3個投藥組，按鼠日均進(jìn)食量折算劑量相當(dāng)于12、42、120 mg·kg-1..d-1。 應(yīng)用 計算 機(jī)隨機(jī)分組，每組雌雄各48只，共384只。

　　1.3　動物飼養(yǎng)　試驗(yàn)在全封閉屏障系統(tǒng)內(nèi)進(jìn)行。其系統(tǒng)內(nèi)平均溫度(22±4)℃，濕度(55±10)%，光照200 lx左右，空氣經(jīng)初、中、高三級過濾(過濾率為99.97%)，換氣12～16次/h，系統(tǒng)保持微正壓，噪音60 dB以下，氨濃度20 mg/kg以下。采用自動飲水裝置供動物飲用。動物在懸掛式鋁合金籠內(nèi)單籠飼養(yǎng)。飼料經(jīng)60Co照射為無菌粉料。試驗(yàn)期間動物自由攝食飲水。

　　1.4　 臨床觀察　體重稱量0～13周每周1次，14～26周每2周1次，27～104周每4周1次。耗食稱量：每周1次。每天觀察1次，瀕死動物每天觀察兩次。

　　1.5　病理檢查　試驗(yàn)期間瀕死或 自然 死亡動物隨時解剖檢查，于第52周做階段解剖，每組雄雌動物各5只，其余均在活體試驗(yàn)終期(第104周)全部解剖。取出腦、腦垂體、甲狀腺、甲狀旁腺、胸腺、氣管、肺、心、肝、脾、腎、腎上腺、食道、胃、十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、盲腸、直腸、肛門、胰腺、膀胱、前列腺、精囊腺、睪丸、卵巢、附睪、子宮、乳腺、皮膚、大腿骨、胸骨、淋巴結(jié)、眼球、唾液腺及所有肉眼認(rèn)為異常的 組織及臟器。稱重臟器包括心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、腦、睪丸、卵巢。標(biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù)為10%的中性福爾馬林緩沖液固定5～7 d，取材之后再次固定12 h。組織以乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片，HE染色，樹膠封固。光鏡檢查。記錄病變的種類及程度。

　　1.6　數(shù)據(jù)處理　體重、耗食等用t檢驗(yàn)。腫瘤發(fā)生率、死亡率等用χ2檢驗(yàn)。

　　2　實(shí)驗(yàn)結(jié)果

　　2.1　腫瘤發(fā)生率　本試驗(yàn)384只動物其中222只出現(xiàn)腫瘤，雄性95只(42.97%)，雌性127只(57.21%)，雄雌比1∶1.3，這種差異與雌鼠腦垂體和乳腺腫瘤的自然發(fā)生率較高有關(guān)。基中垂體腫瘤高劑量與低劑量分別為25%和37.5%，雌性分別為54%和62.5%。乳腺腫瘤雄性各組只是偶發(fā)1～2例，雌性對照組為33.33%，高劑量組為35.41%。白血病雄性對照組1例，而高劑量組未發(fā)現(xiàn)，雌性對照組1例。高劑量組2例。肺腺瘤雄性對照組及中、高劑量組各1例，雌性僅高劑量組出現(xiàn)1例。肝癌雄性對照組和高劑量組各1例，雌性各劑量組均未發(fā)生。甲狀腺瘤雄性劑量組發(fā)生率較高，低劑量組2例，中、高劑量組各1例，而雌性僅高劑量組有1例。甲狀腺癌雄性對照組、高劑量組各1例，雌性僅高劑量組有1例，這些差異均無顯著性(表1)。

　　2.2　腫瘤檢出數(shù)　在222只發(fā)生腫瘤的大鼠中共檢出298個腫瘤，其中每只有1、2、3、4、6個腫瘤的大鼠分別為166、41、6、8、1只。平均腫瘤數(shù)對照組、低、中、高劑量組雄性依次為1.0、1.45、1.11、1.18個;雌性依次為1.43、1.43、1.41、1.81個。各組均無明顯的劑量-反應(yīng)關(guān)系。

　　2.3　不同時期腫瘤發(fā)生數(shù)　各劑量組大鼠腫瘤發(fā)生時間，除雄性低劑量組1例腦垂體腫瘤發(fā)生于第10個月外，其余都在1年半以后發(fā)生，在發(fā)生時間上各劑量組和對照組差異無顯著性。

　　2.4　動物 自然 死亡累積、時間及死因 分析 　中途自然死亡動物的累積數(shù)，對照組與高劑量組雄性分別為18只(37.50%)、15只(31.31%);雌性分別為19只(39.58%)、16只(33.33%)，無 統(tǒng)計學(xué)意義。動物死亡時間各劑量組間差異亦無顯著性。中途死亡動物主要死因?yàn)槟X垂體腫瘤、乳腺腫瘤、白血病等，各劑量組無明顯差異。

　　3　討論

　　本試驗(yàn)結(jié)果高劑量組出現(xiàn)輕度中毒現(xiàn)象，與對照組比較體重受到抑制7%，各劑量組104周生存率均在50%以上。而且死亡大鼠自溶不能進(jìn)行病理檢查者不超過5%，這些都符合國際致癌試驗(yàn)的設(shè)計要求[1]。

　　表1　各劑量組腫瘤類型及發(fā)生數(shù)(只)

　　腫瘤雄性雌性

　　0(mg/kg)200(mg/kg)700(mg/kg)2 000(mg/kg)0(mg/kg)200(mg/kg)700(mg/kg)2 000(mg/kg)

　　肺腺瘤10110001

　　心纖維瘤01000000

　　肝癌10010000

　　膽管瘤00000010

　　腎胚胎瘤00200000

　　胰島細(xì)胞瘤10200000

　　胰腺瘤00010000

　　胰腺癌00110000

　　甲狀腺腺瘤02110001

　　甲狀腺腺癌10010001

　　腦垂體腺瘤1817161228232624

　　腦垂體腺癌00102532

　　乳腺腺瘤01002521

　　乳腺纖維腺瘤03111391312

　　乳腺癌00201004

　　腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤11011000

　　胃乳頭狀瘤00100100

　　胃惡纖組00000100

　　腦血管瘤00100000

　　腦腺瘤01000000

　　脾網(wǎng)織細(xì)胞瘤01000001

　　白血病22101012

　　子宮血管纖維瘤00001000

　　子宮肌瘤00000010

　　皮下纖維瘤01000000

　　纖維肉瘤00010000

　　血管瘤00000101

　　血管惡纖組00010020

　　皮膚鱗癌01000000

　　腹腔纖維瘤00010000

　　腸系膜淋巴囊腫00000001

　　每組實(shí)驗(yàn)動物數(shù)為48只　　 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所[2] 參考 WHO的致癌試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)，制定出我國致癌試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)下列之一，并經(jīng)統(tǒng)計學(xué)處理有顯著差異者可以認(rèn)為致癌陽性結(jié)果：(1)腫瘤僅發(fā)生在染毒組，對照組無此類腫瘤;(2)染毒組與對照組均發(fā)生腫瘤，但染毒組明顯高于對照組;(3)染毒組多發(fā)生腫瘤多，而對照組無或少數(shù)動物有多發(fā)性腫瘤;(4)染毒組與對照組腫瘤發(fā)生率無明顯差異，但染毒動物發(fā)生時間較早。本試驗(yàn)結(jié)果不具有上述情況，此外從惡性腫瘤、癌前病變發(fā)生率來看，染毒組與對照組差異無顯著性，而且出現(xiàn)的各類腫瘤其發(fā)生率都在SD大鼠自發(fā)性腫瘤背景范圍之內(nèi)[3]，林裕造等[1]還提出值得重視的3點(diǎn)補(bǔ)充意見：(1)在染毒組出現(xiàn)該動物品系中很少見的腫瘤，即使個別出現(xiàn)也應(yīng)引起重視;(2)惡性腫瘤發(fā)生率低而良性腫瘤發(fā)生率高也是重要指標(biāo);(3)即使都屬于自發(fā)性腫瘤，但染毒組發(fā)生早對陽性判定也有一定價值，本試驗(yàn)結(jié)果未見類似上述情況。

　　國外有人曾統(tǒng)計通過致癌化學(xué)物質(zhì)制作癌癥模型試驗(yàn)結(jié)果證明，其誘發(fā)腫瘤與自發(fā)性腫瘤不同點(diǎn)是大部分在1年以內(nèi)出現(xiàn)誘發(fā)腫瘤，并提出如高劑量組1年半以上出現(xiàn)的腫瘤難以作為致癌指標(biāo)。本試驗(yàn)中出現(xiàn)的腫癌大部分在1年以上，而且絕大多數(shù)在1年半以上，如雌性大鼠乳腺癌高劑量組4例，對照組1例都是在兩年終期出現(xiàn)，當(dāng)屬自發(fā)性腫瘤。 文獻(xiàn) 報道SD大鼠自發(fā)性腫瘤的平均腫瘤數(shù)雄性1.6個，雌性2.0個。而本試驗(yàn)中發(fā)生腫瘤動物的平均腫瘤數(shù)略低，雄性、雌性分別為1～1.45、1.41～1.81個，這可能與檢查 組織數(shù)量多少有關(guān)。

　　綜上所述，乙草胺試驗(yàn)結(jié)果提示在本中心現(xiàn)有試驗(yàn)條件下，對SD大鼠未出現(xiàn)致癌陽性結(jié)果。

　　參考文獻(xiàn)

　　[1]　林裕造、高橋道人.動物致癌性試驗(yàn)的評價.病理と 臨床，1983，1：895-904.

　　[2]　衛(wèi)生部，農(nóng)業(yè)部.農(nóng)藥安全性毒 理學(xué) 評價程序.1991，8-9.

　　[3]　今井清，吉村慎介.Sprague-Dawley系自然發(fā)生腫瘤.J Toxicol Pathol,1988,1：7-12.